Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的现实生活中逐渐扩展

从第一次显现出来呼吸道自身病原躯到显现出来1型肾病临床病因的的蓬勃发展率在儿童时期就有很好的描述，多个呼吸道自身病原躯乙型肝炎的儿童之后有70%在血清转换后10年内患上肾病，而随访15年的儿童这一比率增大到84%。比起之下，占到临床1型肾病一半以上的型1型肾病的肺癌的系统还不能得到充分的分析。

越来越多的人开始应用于分期的系统来定义1型肾病的的蓬勃发展：个躯在显现出来多种呼吸道自身病原躯时转至第1阶段，显现出来血糖异常时转至第2阶段，显现出来病因时转至第3阶段。一些多发呼吸道自身病原躯乙型肝炎的个躯，在1期和2期，的蓬勃发展较快，并蓬勃发展为肺癌的1型肾病。我们之后描述了一小组在首次检查到多种呼吸道自身病原躯样本后至较少10年无肾病的却是慢的蓬勃发展者，这小组病人人数较少，但特性并不明确。随后，我们发现呼吸道自身抗原特异性CD8+T线粒躯反应在的蓬勃发展较快的病人之后基本上不存在，但在全面性肺癌和长期存在的肾病病人之后很容易检查到。这显然表明，与的蓬勃发展病人比起，这些病人自身免疫反应的调节增强。

中期分析表明，尽管调节性T线粒躯(Treg)数量正常，但肾病病人存在一些机制缺陷，其之后仅限于对IL-2的反应意志力降低。此外，肾病病人之后的effectCD4+T线粒躯显然对调节更具抵抗性，躯现为effectT线粒躯的减缓消退，自然归因于的Treg和躯外归因于的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T线粒躯之后IL-2反应消退。本分析的目的是描述了CD4+调节性T线粒躯(Treg)在一小群却是较快的蓬勃发展者之后的特性，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以这群人辅以的斜向分析，在21岁此表确诊的病人亲属之后检查1型肾病的危险因素。我们之后描述了长期较快的蓬勃发展者的特性，他们保持稳定多重呼吸道自身病原躯乙型肝炎超过10年，但不能显现出来肾病的临床病因，慢性或非完成性自身免疫。随后，10名暂时保持稳定无肾病并愿意提供大量血液样本的较快的蓬勃发展者扩及T和B线粒躯机制量化。在目前的分析之后，8名慢的蓬勃发展者(SP小组)，之后位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的呼吸道自身病原躯乙型肝炎。所有的旁观者都处于1型肾病的蓬勃发展的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身病原躯对某些抗原的黄疸，然而，一名病人已经处于2期至较少6年，但不能显现出来临床病因，一名病人被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化之后对该供躯完成了单独评量。除去外周血单个核线粒躯(PBMCs)，采用多常量流式线粒躯心法和T线粒躯减缓试验评量供躯之后Treg的增益、表观和机制。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)完成无督导聚类量化，评量Treg表观。

结果：与有益供躯比起，来自慢的蓬勃发展躯的知觉CD4+T线粒躯的督导聚类显示，激活的知觉CD4+ Treg增益增大，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白质(GITR)传达增大有关。一名HbA1c升高的病人与的蓬勃发展较快者和归一化的对照小组比起，Treg谱有所不同。机制量化表明，与有益供躯比起，来自较快的蓬勃发展躯的Treg特异性的CD4+effectT线粒躯减缓值得注意损害。躯现为对effectCD4+T线粒躯CD25和CD134传达的减缓增大。

绘出1 深入的表观量化显示，CD4+Treg亚型在慢的蓬勃发展字段之后增大。由FlowSOM生成的Treg一楼，聚集在来自所有供躯的活CD4+CD45RA -线粒躯上。根据记号物传达鉴定出10个元簇:知觉T线粒躯_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;知觉T cell_4;CD49b知觉T线粒躯;HLA-DR + GITR +知觉T线粒躯;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)应用于9个不同Treg记号生成的10个元簇的MST。每个路由表代表人一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在路由表小组周围上色。每个路由表之后的饼绘出指出单个记号的传达级别。(b)每个元聚类的热绘出，以显示整躯记号传达。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)生成绘出，以及FlowSOM识别的每个元簇的沙质。(e-l)比起丰度为每个metacluster箱子终点站绘出(丰度> 0.05%)确定为HD和SP小组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +知觉T线粒躯(h)、知觉T cell_1(i),知觉T cell_2 (j),知觉T cell_3 (k) n d CD49b知觉T线粒躯(l)。黄色左上角代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验。此键适用于绘出形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

绘出2 应用于CITRUS的预测模型证明，Treg增益的增大是的蓬勃发展较快的红色。分级门控(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP旁观者和归一化的HD旁观者在CD4+CD45RA−T线粒躯上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会性的权威性绘出。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达完成除去，模拟FlowSOM社会性。(b) HD(黑点)和SP(杂色)小组以及供躯SP 606(黄色)之后CD25+ cd127的增益摘要绘出。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控子集的箱子终点站绘出;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出的簇被识别为SP和HD字段中间的不同。(j)箱子终点站绘出显示了在SP(杂色)和HD(灰点)小组之后，CITRUS知觉Treg_3和Treg_4的比起丰度(比率)。(k)直方绘出显示每个簇的表观(粉红色)和Treg记号比起传达与故事情节传达(金色);上列，缓存Treg_3;下面悄悄，缓存Treg_4。故事情节与所有其他簇之后记号的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩检验

绘出3 与有益献血者比起，的蓬勃发展较快者知觉treg的GITR增大。每个知觉CD4+T线粒躯元簇(知觉T线粒躯_1;知觉T cell_2;知觉T cell_3;CD49b +知觉T线粒躯;HLA-DR + GITR +知觉T线粒躯;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个传达记号的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)字段的传达热绘出(sp606不仅限于在内)。(c,d)知觉Treg_4元簇之后所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR传达串联，显示直方绘出(c)和摘要绘出(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和检验，p< 0.07(黄色)所有供躯仅限于，p< 0.05(金色)供躯SP 606和归一化的HD不仅限于在测试之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之后GITR传达，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)串联，显示直方绘出(e)和摘要绘出(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩检验

绘出4 来自较快的蓬勃发展的CD4+ treg线粒躯控制effectCD4+T线粒躯的意志力降低。SP小组用金色的终点站和左上角指出，HD小组用银色的终点站和左上角指出，黄色的终点站/左上角指出供躯sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线粒躯完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被记号为CFSE, Treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸线粒躯，培育出3天后完成流式线粒躯心法检查。(a-d)与CD4+这样的话者比起应的treg培育出(自躯)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育出。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓总和。应用于乙型肝炎对照(激活的响应线粒躯含treg)测算减缓总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

绘出5 effectCD4+T线粒躯对较快的蓬勃发展的T线粒躯酪氨酸的减缓更敏感。SP小组用金色的终点站和左上角指出，HD小组用银色的终点站和左上角指出，黄色的终点站/左上角指出供躯sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线粒躯完成分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel记号，treg按观察的比率滴定。用抗CD3 /28微珠酪氨酸线粒躯，培育出3天后完成流式线粒躯心法(CD25反染)和线粒躯因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育出。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓次之(b)。(c,d) CD25减缓次之(c)和CD134减缓次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出之后的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较快的蓬勃发展子的酪氨酸知觉CD4+Treg在GITR传达之后得到了扩展和丰富，强调了全面性分析Treg在1型肾病效用个躯之后的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28