Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者方面缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到去甲自身抗基底到用到1DF白血病外科患者的方面率在儿童后期就有总括佳的揭示，多个去甲自身抗基底特征性的儿童当中有70%在小鼠转换后10天内患上白血病，而随访15年的儿童这一人口比例降低到84%。相比较，占到外科1DF白血病一半以上的DF1DF白血病的发病机制还未想得到充分的研究。

越来越多的人开始用于分段管理系统来定义1DF白血病的方面：个基底在用到多种去甲自身抗基底时踏入第1阶段，用到血糖异常时踏入第2阶段，用到患者时踏入第3阶段。一些多发去甲自身抗基底特征性的个基底，在1期和2期，方面总括快，并发展为发病的1DF白血病。我们之前揭示了一三组在首次验证到多种去甲自身抗基底抽样后将近10年无白血病的较快方面者，这三组病症总人数少，但构造比较明确。随后，我们发现去甲自身淋巴细胞内抗体CD8+T细胞内反应在方面减慢的病症当中整体不存有，但在近期发病和长期存有的白血病病症当中很容易验证到。这也许证明，与方面病症相比，这些病症自身免疫细胞的缓冲增强。

后期研究证明，尽管缓冲性T细胞内(Treg)数量正常，但白血病病症存有一些动态瑕疵，其当中包括对IL-2的反应能力降低。此外，白血病病症当中的物理现象CD4+T细胞内也许对缓冲更具抵抗性，展示出为物理现象T细胞内的选择性增强，自然归因于的Treg和基底外归因于的诱导Treg，以及淋巴细胞内年中的CD4+T细胞内当中IL-2反应增强。本研究的目的是揭示了CD4+缓冲性T细胞内(Treg)在海岸边总括减慢方面者当中的构造，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁下述确诊的病症亲戚当中体检1DF白血病的危险因素。我们之前揭示了长期减慢方面者的构造，他们保持稳定多重去甲自身抗基底特征性超过10年，但未用到白血病的外科患者，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名在此期间保持稳定无白血病并想提供大量血浆抽样的减慢方面者归属于T和B细胞内动态量化。在现今的研究当中，8名慢方面者(SP三组)，当中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的去甲自身抗基底特征性。所有的举例来说都处于1DF白血病方面的1期，尽管一些人随后失去了去甲自身抗基底对某些淋巴细胞内的特征性反应，然而，一名病症已经处于2期将近6年，但未用到外科患者，一名病症被临床为白血病，该人会72岁，在采集试验抽样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据量化当中对该供基底展开了单独评量。分立外周血单个核分裂细胞内(PBMCs)，采用多表述式流式细胞内术和T细胞内选择性试验性评量供基底当中Treg的频谱、表DF和动态。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和复出)展开无指导聚类量化，评量Treg表DF。

结果：与心理健康供基底相比，来自慢方面基底的梦境CD4+T细胞内的指导聚类标示出，触发的梦境CD4+ Treg频谱降低，与糖皮质激素诱导的TNFR管理系统性蛋白(GITR)表述降低有关。一名HbA1c升高的病症与方面减慢者和转换的折衷三组相比，Treg谱各有不同。动态量化证明，与心理健康供基底相比，来自减慢方面基底的Treg介导的CD4+物理现象T细胞内选择性突出受损。展示出为对物理现象CD4+T细胞内CD25和CD134表述的选择性降低。

平面图1 熟悉的表DF量化标示出，CD4+Treg亚DF在慢方面函数调用当中降低。由FlowSOM生成的Treg房，聚集在来自所有供基底的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标识物表述鉴定出10个元簇:梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;缓存Treg_1;缓存Treg_2;缓存Treg_3;和缓存Treg_4。(a)用于9个不同Treg标识生成的10个元簇的MST。每个路由都有一个战略性(100个战略性)，更大的元战略性(10个元战略性)在路由三组外围上色。每个路由当中的年糕平面图声称单个标识的表述高级别。(b)每个元聚类的热平面图，以标示出整基底标识表述。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)生成平面图，以及FlowSOM辨识的每个元簇的较厚。(e-l)比较原子量为每个metacluster罐支线平面图(原子量> 0.05%)确切为HD和SP三组:缓存Treg_2 (e),缓存Treg_3 (f),缓存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞内(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞内(l)。橘色带子都有人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 用于CITRUS的预测模DF证实，Treg频谱的降低是方面减慢的标记。基准去总括化(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP举例来说和转换的HD举例来说在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的都有性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3非金属，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分立，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)三组以及供基底SP 606(橘色)当中CD25+ cd127的频谱概述平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去总括化子集的罐支线平面图;(c) HLA-DRloGITR−(缓存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(缓存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(缓存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+缓存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述风力着色，记号突出的簇被辨识为SP和HD函数调用间的不同。(j)罐支线平面图标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)三组当中，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比较原子量(人口比例)。(k)直方平面图标示出每个簇的表DF(红色)和Treg标识比较表述与剧中表述(深蓝色);上列，缓存Treg_3;请注意恰巧，缓存Treg_4。剧中与所有其他簇当中标识的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图3 与心理健康献血者相比，方面减慢者梦境treg的GITR降低。每个梦境CD4+T细胞内元簇(梦境T细胞内_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞内;HLA-DR + GITR +梦境T细胞内;缓存Treg_2;缓存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述标识的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)函数调用的表述热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇当中所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)的FlowSOM GITR表述串联，标示出直方平面图(c)和概述平面图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(橘色)所有供基底包括，p< 0.05(深蓝色)供基底SP 606和转换的HD不包括在测试当中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs当中GITR表述，从基准去总括化，从所有HD(灰色)、所有SP(深蓝色)和SP 606(橘色)串联，标示出直方平面图(e)和概述平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

平面图4 来自减慢方面的CD4+ treg细胞内控制物理现象CD4+T细胞内的能力降低。SP三组用深蓝色的支线和带子声称，HD三组用红色的支线和带子声称，橘色的支线/带子声称供基底sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被标识为CFSE, Treg按注意到的人口比例试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养3天后展开流式细胞内术验证。(a-d)与CD4+这样的话者比较应的treg培养(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培养。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE选择性%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性%-。用于特征性折衷(触发的鼓动细胞内仅有treg)推算选择性%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 物理现象CD4+T细胞内对减慢方面的T细胞内活化的选择性更恰当。SP三组用深蓝色的支线和带子声称，HD三组用红色的支线和带子声称，橘色的支线/带子声称供基底sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel标识，treg按注意到的人口比例试样。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养3天后展开流式细胞内术(CD25反染)和细胞内因子量化。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培养。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE选择性百分比(b)。(c,d) CD25选择性百分比(c)和CD134选择性百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养当中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自减慢方面子的活化梦境CD4+Treg在GITR表述当中想得到了扩展和比较丰富，强调了必要性研究Treg在1DF白血病风险个基底当中的表型的有效性。

原文注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28