Diabetologia：激活但功能受到影响的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出现胰脏自身抗形体到经常出现1M-冠心病临床数据分析腹泻的令人满意亲率在幼儿时期就有很好的描述，多个胰脏自身抗形体中性的幼儿中都有70%在血液转换后10年内入院冠心病，而随访15年的幼儿这一分之一缩减到84%。相比，%临床数据分析1M-冠心病一半以上的M-1M-冠心病的发作机制还不能得到适当的数据分析。

越来越多的人开始运用于有系统系统来定义1M-冠心病的令人满意：个形体在经常出现多种胰脏自身抗形体时重回第1过渡阶段，经常出现血糖异常时重回第2过渡阶段，经常出现腹泻时重回第3过渡阶段。一些多发胰脏自身抗形体中性的个形体，在1期和2期，令人满意较迟，并发展为发作的1M-冠心病。我们之前描述了一组成员在首次检验到多种胰脏自身抗形体样品后仅仅10年无冠心病的变迟令人满意者，这组成员腹泻人口数少，但形态极为明确。随后，我们挖掘出胰脏自身抗形体特异性CD8+T细胞核反应中间形体在令人满意缓迟的腹泻中都基本不存在，但在近期发作和仍然存在的冠心病腹泻中都很不易检验到。这意味著暗示，与令人满意腹泻相比，这些腹泻自身免疫中间形体的闭环强化。

早期数据分析暗示，尽管闭环性T细胞核反应(Treg)数量正常，但冠心病腹泻存在一些功用缺陷，其中都最主要对IL-2的中间形体能力也降低。此外，冠心病腹泻中都的振荡CD4+T细胞核反应意味著对闭环更具抵抗性，发挥为振荡T细胞核反应的依赖性减弱，自然归因于的Treg和形体外归因于的诱导Treg，以及抗形体经历的CD4+T细胞核反应中都IL-2中间形体减弱。本数据分析的目的是描述了CD4+闭环性T细胞核反应(Treg)在大群极缓迟令人满意者中都的形态，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

原理：BOX数据分析是一项以年轻人为基础的纵向数据分析，在21岁不限确诊的腹泻家庭成员中都检查1M-冠心病的致命诱因。我们之前描述了仍然缓迟令人满意者的形态，他们保持多重胰脏自身抗形体中性超过10年，但不能经常出现冠心病的临床数据分析腹泻，迟性或非神经性自身免疫。随后，10名继续保持无冠心病并希望提供大量血液样品的缓迟令人满意者划入T和B细胞核反应功用分析。在目前的数据分析中都，8名迟令人满意者(SP组成员)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁密切关系的胰脏自身抗形体中性。所有的大多数人都处于1M-冠心病令人满意的1期，尽管一些人随后丧失了胰脏自身抗形体对某些抗形体的中性中间形体，然而，一名腹泻早已处于2期仅仅6年，但不能经常出现临床数据分析腹泻，一名腹泻被诊断为冠心病，该病人72岁，在热带植物物理样品时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在数据分析中都对该遗传物质透过了单独分析报告。分离外周血单个核反应细胞核反应(PBMCs)，采用多参数流式细胞核反应术和T细胞核反应依赖性试验分析报告遗传物质中都Treg的振幅、遗传基因和功用。运用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、相关联和转回)透过无监督聚类分析，分析报告Treg遗传基因。

结果：与保健遗传物质相比，来自迟令人满意形体的思绪CD4+T细胞核反应的监督聚类说明了，转录的思绪CD4+ Treg振幅缩减，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c急剧下降的腹泻与令人满意缓迟者和归一化的相异组成员相比，Treg序有所相异。功用最近，与保健遗传物质相比，来自缓迟令人满意形体的Treg介导的CD4+振荡T细胞核反应依赖性明显损毁。发挥为对振荡CD4+T细胞核反应CD25和CD134传达的依赖性缩减。

三幅1 深入的遗传基因分析说明了，CD4+Treg亚M-在迟令人满意队列中都缩减。由FlowSOM聚合的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞核反应上。根据标有物传达鉴定出10个元簇:思绪T细胞核反应_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞核反应;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核反应;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)运用于9个相异Treg标有聚合的10个元簇的MST。每个链表都有一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在链表组成员周围上色。每个链表中都的点心三幅坚称单个标有的传达级别。(b)每个元聚类的热三幅，以说明了整形体标有传达。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)聚合三幅，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对数量级为每个metacluster箱点阵三幅(数量级> 0.05%)确定为HD和SP组成员:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞核反应(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞核反应(l)。紫色边框都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon筛选记号秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 运用于CITRUS的预测模M-证实，Treg振幅的缩减是令人满意缓迟的标志。这两项门控(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP大多数人和归一化的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞核反应上的相异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的都有性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达透过分离，演示FlowSOM群形体。(b) HD(黑点)和SP(黑纹)组成员以及遗传物质SP 606(紫色)中都CD25+ cd127的振幅汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控叔父集的箱点阵三幅;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，箭头突出的簇被辨别为SP和HD队列密切关系的相异。(j)箱点阵三幅说明了了在SP(黑纹)和HD(灰点)组成员中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对数量级(分之一)。(k)灰度说明了每个簇的遗传基因(粉红色)和Treg标有相对传达与历史背景传达(黄色);上列，磁盘Treg_3;上面一行，磁盘Treg_4。历史背景与所有其他簇中都标有的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon筛选记号秩检验

三幅3 与保健献血者相比，令人满意缓迟者思绪treg的GITR缩减。每个思绪CD4+T细胞核反应元簇(思绪T细胞核反应_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞核反应;HLA-DR + GITR +思绪T细胞核反应;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个传达标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热三幅(sp606不最主要在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(白色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR传达串联，说明了灰度(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon筛选记号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有遗传物质最主要，p< 0.05(黄色)遗传物质SP 606和归一化的HD不最主要在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR传达，从这两项门控，从所有HD(白色)、所有SP(黄色)和SP 606(紫色)串联，说明了灰度(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon筛选记号秩检验

三幅4 来自缓迟令人满意的CD4+ treg细胞核反应控制振荡CD4+T细胞核反应的能力也降低。SP组成员用黄色的线和边框坚称，HD组成员用黑色的线和边框坚称，紫色的线/边框坚称遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核反应透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被标有为CFSE, Treg按观察的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠激活细胞核反应，人才3当晚透过流式细胞核反应术检验。(a-d)与CD4+需要的话者相对应的treg人才(免疫)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD需要的话者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE依赖性比亲率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性比亲率。运用于中性相异(转录的响应细胞核反应不含treg)计算依赖性比亲率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 振荡CD4+T细胞核反应对缓迟令人满意的T细胞核反应激活的依赖性更敏感。SP组成员用黄色的线和边框坚称，HD组成员用黑色的线和边框坚称，紫色的线/边框坚称遗传物质sp606。运用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核反应透过分选。CD4+CD25−(需要的话者)被cfsel标有，treg按观察的分之一滴定。用抗CD3 /28微珠激活细胞核反应，人才3当晚透过流式细胞核反应术(CD25反染)和细胞核反应因叔父分析。HD Treg与HD、SP或sp606需要的话者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE依赖性花红(b)。(c,d) CD25依赖性花红(c)和CD134依赖性花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中都的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自缓迟令人满意叔父的激活思绪CD4+Treg在GITR传达中都得到了扩展和丰富，强调了必要性数据分析Treg在1M-冠心病风险个形体中都的值得注意的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28